La detección de contaminación
por Salmonella spp. en aves de corral y sus derivados se
realiza utilizando métodos convencionales de cultivos microbiológicos, los
cuales presentan limitaciones importantes para la detección eficaz de dicha
contaminación. Los métodos clásicos de diagnóstico bacteriológico de Salmonella spp.
son laboriosos, requieren tiempo y no todas las cepas aisladas pueden ser
identificadas, por lo cual la información que brindan es limitada y dificulta
la toma de decisiones.
La sensibilidad y especificidad de
los métodos de cultivo dependen de la calidad, la toma adecuada de muestras, el
almacenamiento y el número de unidades formadoras de colonia (UFC) presentes en
la muestra, además de la habilidad del microbiólogo para detectar su
presencia y la necesidad de un laboratorio de microbiología de alimentos para
realizar el proceso.
Sin embargo, a través del tiempo se
han desarrollado métodos más sensibles y específicos que detectan la infección
porSalmonella spp. en humanos y que aún no han sido implementados
en la industria agropecuaria. Estas alternativas para la detección de
contaminación por Salmonella spp. en huevos consisten en la
utilización de pruebas de diagnóstico rápidas, sensibles y específicas basadas
en métodos de detección molecular.
La técnica basada en la reacción en
cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction o PCR) ha
revolucionado el diagnóstico molecular de las enfermedades infecciosas.
Razones científico-técnicas de por
qué utilizar la técnica PCR para detección
de Salmonelosis:
1. A diferencia de los métodos tradicionales que requieren 6 o 7 días para dar un resultado definitivo, PCR permite obtener los resultados en sólo 1 a 3 días, dependiendo de diversas modificaciones en el protocolo de trabajo, permitiendo la detección e identificación rápida y precisa de Salmonella.
1. A diferencia de los métodos tradicionales que requieren 6 o 7 días para dar un resultado definitivo, PCR permite obtener los resultados en sólo 1 a 3 días, dependiendo de diversas modificaciones en el protocolo de trabajo, permitiendo la detección e identificación rápida y precisa de Salmonella.
2. La sensibilidad
de las pruebas de PCR oscilan entre el 70 y 75% cuando la
extracción del ADN se realiza con un método simple de lisis, en el cual no
se usó la purificación del ADN; pero estos resultados de sensibilidad
pueden mejorarse modificando el método de extracción, incluyendo un paso de
purificación del ADN o utilizando un método comercial de extracción, pues las
muestras de clara-yema tienen alto contenido proteico que puede interferir en
la PCR. Sin embargo, la sensibilidad alcanzada con la estandarización de
estas pruebas de PCR es más alta que la que se obtiene con cultivos
convencionales, los cuales alcanzan una sensibilidad variable que puede
fluctuar desde el 0-100% de acuerdo a varios factores, como la viabilidad de
las bacterias que se encuentran en la muestra y la recolección y transporte de
la misma. Esto significa que la PCR no requiere de la existencia de bacterias
vivas o viables en la muestra para diagnosticar una contaminación o infección.
3. La utilidad de la prueba de PCR
para detección del gen hilA está basada en la posibilidad de
utilizarla para detectar contaminación por el género Salmonella en
huevos y otras muestras. La PCR múltiple confirma si esta bacteria pertenece
al serovar Typhimurium o Enteritidis, arrojando una mayor información si se
precisa la identificación por serotipo.
4. La especificidad de la PCR
múltiple es de 98,4% y la del gen hilA de un 100%; ambas
especificidades son adecuadas para confiar que el resultado es verdadero,
siendo la PCR para hilA 100% específica de género, lo cual tiene
ventajas al momento de hacer un diagnóstico de contaminación de huevos por esta
bacteria.
5. La utilización de estas pruebas de
PCR permiten hacer una verificación y control de la salmonelosis. Por su
rapidez y precisión, ésta será una herramienta fundamental para lograr la
comercialización internacional de huevos, cumpliendo una de las normas de
conrol sanitario exigidas para tal fin.
Referencia:
0 comentarios:
Publicar un comentario