Para identificar Samonella spp se puede realizar pruebas de
tamizaje mediante:
Discos de AMP, AMC, CEP, FOX y C3G (CTX, CAZ) o C2G (CXM)
Y pruebas confirmatorias como son:
Caracterización de la enzima (PCR, hibridación con sondas
específicas de familia, punto isoeléctrico, secuenciación de ADN.
Para la identificación del género de Salmonella se puede
realizar:
Agar triple azúcar hierro (TSI)
Agar lisina hierro (LIA)
Bibliografía:
López M. Evaluación de la resistencia antibiótica de los
microorganismos aislados en casos de mastitis clínica en una exploración
lechera. Universidad de San Carlos de Guatemala. Guatemala: 2008. (acceso 05 de
junio de 2016) Disponible en: http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/10/10_1098.pdf
“La diferencia entre genética y epigenética probablemente
puede compararse con la diferencia que existe entre escribir y leer un libro.
Una vez que el libro ha sido escrito, el texto (los genes o la información
almacenada en el ADN) será el mismo en todas las copias que se distribuyan
entre los lectores. Sin embargo, cada lector podría interpretar la historia del
libro de una forma ligeramente diferente, con sus diferentes emociones y
proyecciones que pueden ir cambiando a medida que se desarrollan los capítulos.
De una forma muy similar, la epigenética permitiría diferentes interpretaciones
de un molde fijo (el libro o código genético) y resultaría en diferentes
lecturas, dependiendo de las condiciones variables en las que se interprete el
molde.” Thomas Jenuwein (Viena, Austria)
Bacterias Salmonella modificadas genéticamente para eliminar
las células del cáncer
Algunas bacterias patógenas poseen características
moleculares que inducen una respuesta inflamatoria antitumoral. Es el caso
de Salmonella enterica del serotipo Typhimurium, conocida
responsable de provocar intoxicaciones alimentarias en humanos que pueden
llegar a ser letales. Aunque los mecanismos exactos por los que este tipo de
bacterias inducen al sistema inmune a atacar las células tumorales todavía se
desconocen, su utilización en el desarrollo de tratamientos contra el cáncer
supone una aproximación muy atractiva que está siendo explorada en la
actualidad.
Estudios de la Universidad del Estado de Arizona (EE.UU),
publicados en mBio, demuestran:
Las Bacterias Salmonella del serotipo Typhimurium
modificadas genéticamente pueden constituir un vehículo para trasladar
compuestos terapéuticos hacia el tejido tumoral, sin dañar al hospedador; razón
por la cual su utilización en el desarrollo de tratamientos contra el cáncer
resulta muy intereante.
La patogenicidad de la Salmonella se debe a la presencia de
una capa de lipopolisacáridos (LPS) alrededor de la célula, por lo que los
investigadores evaluaron la seguridad y la capacidad terapéutica contra el
cáncer, de cepas de Salmonella mutantes para la estructura de LPS.
Pero, la relación variantes en las cepas modificadas con
nivel de patogenicidad (ahora aceptable) tenían muy poco potencial terapéutico.
Para solucionar el problema y mejorar la cepas bacterianas,
añadieron otra modificación genética a las bacterias, que permitía atenuar los
genes implicados en la biosíntesis de LPS de forma condicional.
Por último, el nuevo diseño de bacterias Salmonella “benigna
e invasiva” fue introducida en un ratón en una forma que no afectaría a
las células normales y que permitiría colonizar los tumores y acceder al
interior de las células cancerosas. Una vez allí se volverían tóxicas. Esta
acción ocurre rápidamente en el tumor, debido al rapidísimo crecimiento y
división celular que ocurre cuando Salmonella accede a un tumor.
Salmonella invade las células del hospedero por un mecanismo
conocido como disparo (trigger). La bacteria envía señales a las células
epiteliales que inducen rearreglos del citoesqueleto dando lugar a la formación
de ondulamiento (ruffling) en su superficie, como respuesta al contacto. Se
reconocen varias proteínas efectoras de la SPI-1, involucradas en los
rearreglos del citoesqueleto: SipA, SopE, SopE2 y SopB. SipA es una proteína de
unión a actina, que inhibe la despolimerización de F-actina y activa T-plasmina,
su chaperona es SicA (SipE en S. enterica serovar Typhi). SopE se comporta como
GEF (guanine exchange factor) en las proteínas RhoGTPasas: CDC42 y Rac
induciendo ruffling de la membrana, que permite la internación de Salmonella
además estimula MAP cinasas (Mitogen-activated protein), Erk (quinasa
reguladora por señales extracelulares), JNK (quinasa terminal) y p38. Es
codificada por un fago temperado defectuoso de la familia P2, localizado en el
centisoma 60 del cromosoma de Salmonella; análisis de la secuencia del ADN
aledañas a sopE, revelaron marcos abiertos de lectura (ORF) con secuencias
significativamente similares a la cola de fagos y recombinasas sitio
específico. La proteína SopE2 muestra un 69% de homología con la secuencia de
SopE, activa a CDC42, la cual actúa con la familia de proteínas del síndrome de
Wiskott-Aldrich (WASP) para activar al complejo Arp2/3, compuesto de 7
subunidades, incluyendo dos proteínas relacionadas con actina y la proteína
p41-Arc. El gen responsable de codificar dicha proteína se encuentra localizado
en el centisoma 40-42. SopB (Salmonella outer protein), como se conoce para S.
enterica serovar Dublin, o SigD (Salmonella invasión genes) para S. enterica
serovar Typhimurium, por su actividad de inositol fosfato fosfatasa, también
reorganiza el citoesqueleto de actina. La proteína SptP (Salmonella protein
tirosin phosphatase) es una tirosin fosfatasa, que independientemente de esta
actividad, se comporta como GAP (GTPasa activating protein), es decir, cambia
Rac·GTP a Rac·GDP, con lo que evita el ruffling estimulado por SopE además
antagoniza la activación de JNK; su porción amino-terminal comparte secuencias
similares con YopE, en su porción carboxi-terminal es semejante a YopH así como
al dominio catalítico de algunas tirosin fosfatasas de células eucarióticas.
Las proteínas efectoras pueden ser consideradas como toxinas
debido a que de alguna manera afectan a la célula eucariótica, sin embargo a
diferencia de éstas, carecen de receptores de unión por lo que son incapaces de
tener acceso directo a su sitio de acción si no es por la contribución del
SSTIII. Todo parece indicar que la penetración de Salmonella a la mucosa
intestinal es esencial para causar infección letal, el hecho de bloquear la
penetración a la mucosa intestinal al mutar genes involucrados en invasión,
permite obtener cepas atenuadas que pudieran ser utilizados como posibles
inmunógenos.1
Alteraciones inducidas en células hospedadoras por acción del
SST3 codificado en SPI-1
Cuando entra en contacto con la célula
epitelial, Salmonella ensambla su SST3 codificado en SPI-1 e inyecta efectores
(esferas amarillas) en el interior del citoplasma eucariota. Los efectores
SopE, SopE2 y SopB activan las GTPasas de tipo Rho, resultando en el
reordenamiento del citoesqueleto de actina en forma de pliegues de membrana, la
inducción de la vía de la MAP kinasa (MAPK) y la desestabilización de las
uniones estrechas entre los enterocitos. Cambios en el citoesqueleto de
actina debidos a la acción de los efectores SipA y SipC, llevan a la
internalización de las bacterias. La señalización por la MAPK activa los
factores de transcripción AP-1 y NF-ĸβ, los cuales a su vez inducen la
expresión de la quemoquina Interleuquina-8 (IL-8), potente quimioatrayente de
leucocitos polimorfonucleares (PMN). SipB induce la activación de la Caspasa-1
en macrófagos, con la consecuente libreación de IL-1β e IL-18, aumentando así
la respuesta inflamatoria. La desestabilización de las uniones estrechas
permite la transmigración de PMNs desde la región basolateral del epitelio a la
apical, la pérdida de líquido de las células y el acceso de las bacterias a la
lámina propia. Posteriormente, el citoesqueleto de actina se recompone y la
señalización por la MAPK se apaga gracias a la acción enzimática de SptP. Esto
resulta también en el silenciamiento de la respuesta inflamatoria, al cual
también contribuyen SspH1 y AvrA mediante la inhibición de la activación de
NF-ĸβ.2
BIBLIOGRAFÍA:
Revista Latinoamericana de Microbiología. Mecanismos moleculares de patogenicidad de Salmonella sp (sede Web). México: Figueroa, I. & Verdugo, A.; 2005 (acceso 21 de mayo de 2016). Disponible en:http://www.medigraphic.com/pdfs/lamicro/mi-2005/mi05-1_2e.pdf
Departamento de Bacteriología y Virología, Departamento de Desarrollo Biotecnológico, Facultad de Medicina, UdelaR. Salmonella y Salmonelosis (sede Web). Betancor, L. & Yim, L.; 2012 (acceso 21 de mayo de 2016). Disponible en: http://higiene1.higiene.edu.uy/DByV/Salmonella_y_salmonelosis.pdf
La expresión de beta-galactosidasa en fusiones transcripcionales con el gen pps (que codifica fosfoenolpiruvato [PEP] sintasa), el operón aceBAK (que codifica la malato sintasa, la isocitrato liasa y la isocitrato deshidrogenasa cinasa, respectivamente) y el operón phs (que codifica la tiosulfato reductasa o una proteína reguladora que controla su expresión) se estudió en Salmonella typhimurium. La síntesis de beta-galactosidasa en estas cepas fue reprimible ya sea por crecimiento en presencia de glucosa o por la presencia de una mutación fruR, que dio como resultado la expresión constitutiva del regulón de fructosa (fru). Se demostró que cinco enzimas de la gluconeogénesis (PEP sintasa, PEP carboxiquinasa, isocitrato liasa, malato sintasa y fructosa-1,6-difosfatasa) se reprimían mediante el crecimiento en presencia de glucosa o la mutación fruR, mientras que las enzimas glucolíticas, enzima I y las enzimas II del sistema fosfotransferasa, así como la fosfofructoquinasa, se indujeron por crecimiento en presencia de glucosa o la mutación fruR. La sobreexpresión de los genes clonados de fru regulon (sin incluir fruR) dio como resultado la represión paralela de las enzimas gluconeogénicas representativas, ciclo de Krebs y enzima desvío de glioxilato. Los estudios con mutantes sensibles a la temperatura de S. typhimurium que sintetizaron proteínas IIIFru lábiles al calor proporcionaron evidencia de que esta proteína desempeña un papel en la regulación de la utilización de sustrato gluconeogénico. Otros análisis mutantes revelaron una relación compleja entre la expresión del gen fru y la expresión de genes que codifican enzimas gluconeogénicas. Tomados en conjunto, los resultados sugieren que varios genes que codifican enzimas catabólicas, biosintéticas y anfibólicas en bacterias entéricas se regulan transcripcionalmente por un mecanismo de represión / activación de catabolitos complejo que puede implicar a la enzima IIIFru del sistema fosfotransferasa como un componente del sistema regulador.
Referencia:
Chin M, Feldheim D et al. Altered Transcriptional Patterns Affecting Several Metabolic Pathways in Strains of Salmonella typhimurium Which Overexpress the Fructose Regulon. JOURNAL OF BACTERIOLOGY. [Internet] 2014 [citado 05 Abril 2018] Disponible en: http://jb.asm.org/content/171/5/2424.full.pdf+html
